常见RNA & DNA 修饰试剂有哪些？

RNA和DNA的化学修饰在生物学研究、药物开发和诊断技术中具有广泛应用。以下是常见的修饰试剂及其应用分类：

一、DNA修饰试剂

1. 甲基化试剂

   - 5-azacytidine：DNA甲基转移酶抑制剂，用于去甲基化研究。  

   - SAM (S-腺苷甲硫氨酸)：天然甲基供体，用于甲基化反应。  

2. 荧光标记  

   - FAM (6-羧基荧光素)、Cy3/Cy5：用于荧光探针标记。  

   - Biotin-dUTP：生物素标记，用于亲和纯化或检测。  

3. 交联剂  

   - 甲醛：用于DNA-蛋白质交联（ChIP实验）。  

   - Psoralen：紫外激活的交联剂，用于DNA双链交联。  

4. 核苷酸类似物  

   - BrdU (5-溴-2'-脱氧尿苷)：用于细胞增殖检测。  

   - EdU (5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)：点击化学标记（比BrdU更高效）。  

5. 其他修饰  

   - DMS (硫酸二甲酯)：用于DNA甲基化足迹分析。  

二、RNA修饰试剂

1. 甲基化相关  

   - N6-甲基腺苷 (m6A) 试剂：如 SAM（甲基供体），METTL3/METTL14（甲基转移酶复合物）。  

2. 荧光标记  

   - FITC-UTP：体外转录时掺入荧光标记RNA。  

   - Alexa Fluor-labeled nucleotides：高亮度标记。  

3. 生物素标记  

   - Biotin-16-UTP：用于RNA pull-down实验。  

4. 末端修饰  

   - T4 RNA连接酶：用于RNA 3'端连接适配体或荧光基团。  

   - 5'端磷酸化试剂：如 T4多核苷酸激酶 (T4 PNK)。  

5. 交联剂  

   - Formaldehyde：RNA-蛋白质交联（如CLIP-seq）。  

   - UV照射：直接诱导RNA-蛋白质交联。  

6. 核苷酸类似物  

   - 4SU (4-硫代尿苷)：光活化交联，用于PAR-CLIP技术。  

   - Pseudouridine (Ψ)：增强mRNA稳定性和翻译效率（用于mRNA疫苗设计）。  

三、通用修饰技术

1. 点击化学 (Click Chemistry)  

   - DBCO-azide：用于标记含炔基或叠氮的核酸（如EdU修饰的DNA/RNA）。  

2. 酶法修饰  

   - APOBEC：胞嘧啶脱氨酶，用于C-to-U编辑。  

   - TET酶：氧化5mC生成5hmC/5fC/5caC。  

四、应用场景

- 表观遗传学研究：DNA/RNA甲基化试剂。  

- 测序文库构建：末端修饰或接头连接试剂。  

- 活细胞成像：荧光标记核苷酸（如BrdU、FITC-UTP）。  

- 治疗性mRNA：假尿苷（Ψ）、5'帽类似物（如CleanCap）。  

注意事项

- 稳定性：某些修饰核苷酸（如5-azacytidine）需避光保存。  

- 毒性：交联剂（如甲醛、DMS）需在通风橱中操作。  

- 兼容性：修饰可能影响下游应用（如PCR效率）。  

根据实验需求选择合适的修饰策略和试剂，并优化反应条件以确保效率。