产品编号 | 产品名称 | 规格 |
BCS0002 | 寡核苷酸-抗体定点标记试剂盒 | 1 个反应 |
寡核苷酸-抗体定点标记试剂盒(Site-Specific Oligonucleotide Antibody Labeling Kit)是一种用于快速偶联寡核苷酸与抗体的即用型生物偶联试剂盒。
基于NHS活化酯或马来酰亚胺活化酯的抗体标记策略会在抗体上导致随机标记,甚至一些在Fab位置的标记可能会影响与抗原的结合功能。而本试剂盒采用二硫键位点特异性的标记策略,P-Linker被插入到二硫键所在位置的同时重构二硫键桥,因此不会影响抗体-抗原的结合功能。
在使用本试剂盒时,一方面,目标抗体的链间二硫键被P-Linker特异性地标记。另一方面,首先寡核苷酸在进行合成时,目标位点的碱基需要首先被氨基化修饰(此步骤由寡核苷酸合成公司完成),随后这些氨基化的碱基可以被N-Linker特异性地标记。最后,当被P-Linker 标记的目标抗体可与被N-Linker 标记的寡核苷酸混合在一起时,P-Linker 与N-Linker可发生特异性结合,使目标抗体与寡核苷酸特异性偶联。
整个过程步骤简洁,操作简便快捷。本试剂盒可用于标记50~500μg 的抗体,所有试剂仅可进行1 次标记。如需其他规格的本试剂盒,可咨询客服。
如需检测本试剂盒中P-Linker标记抗体的标记度(DOL)也可使用带有N-Linker标记的荧光染料,具体情况可咨询客服。
组分 | 浓度 | 体积 | 规格 |
P-Linker 标记液(抗体) | 5.0 nmol/μL | 20μL | 1管,棕色管,棕色盖 |
N-Linker 标记液(核酸) | 5.0 nmol/μL | 20μL | 1管,棕色管,棕色盖 |
2× 抗体标记缓冲液 | 2× | 500μL | 1管,透明管,蓝色盖 |
2× 核酸标记缓冲液 | 2× | 500μL | 1管,透明管,蓝色盖 |
2× 抗体预处理缓冲液 | 2× | 500μL | 1管,透明管,白色盖 |
1× 稀释缓冲液 | 1× | 1mL | 1管,透明管,白色盖 |
10× 终止反应液 | 10× | 100μL | 1管,透明管,红色盖 |
10K, 500μL超滤管 | / | / | 1个 |
本试剂盒可用于10~120bp的寡核苷酸或不超过80bp的双链核苷酸与抗体的偶联。核苷酸需首先被氨基化修饰,这一步骤可有核苷酸合成公司完成。
待标记抗体样品中的蛋白性稳定剂可能会影响最终标记效果,建议先进行纯化,除去蛋白性稳定剂后再进行标记。
待标记抗体样品中存在非蛋白性稳定剂时,可使用试剂盒中的超滤管和1×稀释缓冲液进行缓冲溶液置换,以提高标记效率。
抗体在标记反应体系中的终浓度高于1mg/mL时,标记效率较高。因此如进行标记前,抗体的初始浓度较低时,也可使用超滤管进行浓缩,使其初始浓度高于2mg/mL。
试剂盒中的10K超滤膜的截留分子量约为10kDa,因此适用于对分子量大于10kDa 的生物分子进行脱盐纯化,不能于对小于此分子量的生物分子进行脱盐纯化。
试剂盒中的超滤管可一次性容纳的最大样本体积为500μL,可浓缩的最小体积为20μL膜上的滞留体积小于5μL。使用时应避免移液枪头触碰超滤膜,以免撕裂或穿刺超滤膜,导致蛋白质损失。