技术派：寡核苷酸药物合成及其杂质分析

目前寡核酸药物大多通过固相亚磷酰胺化学法进行合成。化学合成按照3'-5'的方向进行。

常用的固相载体为可控微孔玻璃珠（CPG），CPG通过linker与初始核苷酸核糖的3'-OH共价结合，而核糖的2'-OH用诸如叔丁基二甲基硅基(TBDMS)的保护试剂进行保护，5'-OH则用双甲氧基三苯甲基（DMT）保护。此外，由于腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶存在伯氨基团，也需要用酰基试剂（例如苯甲酰基）进行保护。

固相合成每个循环主要包括四个步骤：去保护、偶联、氧化和加帽。合成中产生的杂质（包括最后的脱保护）有以下几种类型：

截短的序列（shortmer sequences）N-X，如N-1，N-2；

更长的序列（longmer sequences）N+X，如N+G，N+A；

硫代磷酸酯键（PS）产生的非对映异构体和氧化产生PO杂质；

胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶脱氨基引起的杂质；

其他杂质，如碱基脱嘌呤杂质、2'-5'连接异构杂质、序列异构体等；